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临床诊断试剂及临床检验分析仪器概述十六
发布时间:2022-03-09浏览:721

 

常用体外诊断试剂的基本原理

按照检验方法,临床诊断试剂大致可分为临床生化检测试剂、免疫学和血清学检测试剂血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、分子生物学诊断试剂等种类。我们就其中主要的临床生化、免疫学、细胞学和基因诊断试剂的基本原理进行阐述。

    免疫酶技术(immunoenzymatic technique)

(1)生物素-亲和素放大系统(biotin - avidin system, BAS) 通过将酶标记在生物素或亲和素上,借助生物素与亲和素的高亲和力和生物素能与抗体结合的特点应用于ELISA,显著提高了检测的敏感性。

(2)双表位ELISA (two-site ELISA) 其方法同双抗体夹心法,只是将包被的抗体和酶标抗体换成针对两个不同抗原决定族的单抗,用于检测单抗的亲和性及表位特异性,亦可用于标本中抗原的快速检测,即在试验时可将待测抗原与酶标单抗同时加入反应体系,减少检测步骤。

(3)斑点免疫渗滤试验(dot immunofiltration assay, DIFA)其原理与ELISA相同,但以微孔膜(如硝酸纤维素膜、尼龙膜等)代替聚苯乙烯板作载体。试验时,将包被有抗原或抗体的微孔滤膜贴置于吸水材料上,依次滴加标本、酶结合物、底物,分别进行洗涤,多余的标本和酶标抗体及洗涤液等可渗滤人吸水材料中,最后阳性标本在膜上呈现着色斑点。

(4) 酶联免疫电转移印渍法 该法将免疫转印技术与酶标技术相结合,有利于分析和检测更加复杂的抗原成分。酶联免疫电转移印渍法分三阶段进行:第一阶段为SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳,先将抗原分成不同的区带(肉眼不可见);第二阶段为转移电泳,即将凝胶上的电泳区带经电泳转移至硝酸纤维素膜上:第三阶段为酶免疫定位,用特异性抗体和酶标抗抗体作间接ELISA,阳性区带呈显色反应。