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八种常见培养基的制备方法
发布时间:2023-12-19浏览:808

对于无菌检验员培训和无菌检验实务来说,掌握常见培养基的特性和制备方法是基本要求。本文为大家介绍硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、中和或灭活用培养基、0.5%葡萄糖肉汤培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)这八种常见培养基的制备方法。

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培养应注意培养条件:硫乙醇酸盐流体培养基(30~35)℃14天;胰酪大豆胨液体培养基(20~25)℃14天。选择培养条件需考虑的因素:产品的性质、制造方法、潜在的微生物污染来源、可能遇到的微生物种类。硫乙醇酸盐流体培养基必须在煮沸后,再进行分装、灭菌。

1.硫乙醇酸盐流体培养基

胰酪胨 15.0g、酵母浸出粉 5.0g、葡萄糖/无水葡萄糖 5.5g/5.0g、氯化钠 2.5g、L-胱氨酸 0.5g、新配制的0.1%刃天青溶液 1.0 mL、硫乙醇酸钠 0.5g(或硫乙醇酸 0.3mL)、琼脂 0.75g、水 1000 mL

除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,加入葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调节pH,使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2。分装至适宜的容器中,其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色)不超过培养基深度的 1/2。灭菌。在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/3 ,否则,须经 100℃水浴加热至粉红色消失(不超过 20 分钟),迅速冷却,只限加热一次,并防止被污染。

除另有规定外,硫乙醇酸盐流体培养基置 (30~35)℃培养。

2.胰酪大豆胨液体培养基

胰酪胨 17.0g、氯化钠 5.0g、大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g、磷酸氢二钾 2.5g、葡萄糖/无水葡萄糖 2.5g/2.3g、水 1000 mL。

除葡萄糖外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2,加入葡萄糖,分装,灭菌。

胰酪大豆胨液体培养基置(20~25)℃培养。

3.中和或灭活用培养基

按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法,在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂,其用量同方法适用性试验。

4.0.5%葡萄糖肉汤培养基(用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检验)

胨 10.0g、氯化钠 5.0g、牛肉浸出粉 3.0g、葡萄糖 5.0g、水 1000 mL。

除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH为弱碱性,煮沸,加入葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调节pH使灭菌后在25℃的pH值为 7.2±0.2,分装,灭菌。

5.胰酪大豆胨琼脂培养基

胰酪胨 15.0g、氯化钠 5.0g、大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g、琼脂 15.0g、水1000 mL。

除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2,加入琼脂,加热溶化后,摇匀,分装,灭菌。

6.沙氏葡萄糖液体培养基

动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g、葡萄糖 20.0g、水 1000 mL。

除葡萄糖外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2,加入葡萄糖,摇匀,分装,灭菌。

7.沙氏葡萄糖琼脂培养基

动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物     10.0g、琼脂15.0g、葡萄糖 40.0g、水 1000 mL。

除葡萄糖、琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入葡萄糖,摇匀,分装,灭菌。

8.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)

马铃薯(去皮) 200g、琼脂 14.0g、葡萄糖 20.0g、水 1000 mL。

取马铃薯,切成小块,加水1000 mL,煮沸20~30分钟,用6~8层纱布过滤,取滤液补水至1000 mL,调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入葡萄糖,摇匀,分装,灭菌。

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