今天来为重庆市无菌检验员培训学员说说革兰氏染色法（Gram Staining）。革兰氏染色法（Gram Staining）是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram
Positive，G+）与革兰氏阴性（Gram Negative，G-），一起来看正文。
一、革兰氏染色法实验原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。
革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
二、革兰氏染色法实验步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法如下：
1.制片：固定，操作同上；
2.初染：滴加草酸铵结晶紫染色1min，水洗；
3.媒染：滴加革兰氏碘液（碘-碘化钾溶液）染色1min，水洗；
4.脱色：滴加体积分数为95%的乙醇，约45s后水洗；
5.复染：滴加番红染液染色3min，水洗并使之干燥；
6.镜检：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
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